Флуоресцентне микроскопије: принципи метода

Абсорптион и поновно емисије лаких даљих неорганским и органским течностима резултат фосфоресценције или флуоресценције. Разлика између појава трајање интервала између апсорпције и емисије светлости флукса. Када је флуоресценција ових процеса јављају готово истовремено, док фосфоресценције - са закашњењем.

istorijski подаци

У 1852., британски научник Стокес је први описао флуоресценције. Је увео нови термин као резултат експеримената са Флуорспар, које емитују црвено под ултраљубичастим светлом. Стокес истакао занимљив феномен. Установљено је да је таласна дужина флуоресцентне радијације увек већа од протока светлости ексцитације.

Да бисте потврдили хипотезу у 19. веку било је много експеримената. Они су показали да мноштво узорака флуоросцирају под утицајем ултраљубичастог светла. Међу материјалима, између осталог, била кристалима, смоле, минерала, хлорофил, сирови дроге, неорганска једињења, витамине, уља. Директна употреба боја за биолошких тестова почело тек 1930. године,

Флуоресцентне микроскопије: Опис

Неки од материјала који се користе у првој половини студија 20. века показивало је високу специфичност. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Захваљујући перформансама, који није могао бити постигнут, супротстављајући метода, метода флуоресцентне микроскопије постао основно средство у биомедицинским и биолошким истраживањима. Исто тако добијени су значајни резултати, и за материјале.

? Које предности ради на начин флуоресцентне микроскопије? Коришћењем нових материјала постало је могуће и избор високо специфична ћелија микроскопскијим компоненти. Флуоресцентне микроскопије може открити појединачне молекуле. Мноштво боја омогућавају идентификацију више ставки одједном. Упркос ограниченом просторном резолуцијом од дифракције границе опреме, која, заузврат, зависи од специфичних својстава узорка, идентификација молекула испод овог нивоа је и врло могуће. Различити узорци после зрачења изложбени аутофлуоресценце. Овај феномен се широко користи у Петрологи, ботанике, индустрији полупроводника.

karakteristike

Проучава ткива животиња или патогене често компликоване или сувише слабе или веома јаке неспецифични аутофлуоресценце. Међутим, вредност у студијама стиче увод у компоненти материјала узбуђен одредјене таласне дужине и емитују потребан интензитет протока светлости. Флуороцхромес делују као бојила способне да самостално прилогу структурама (видљивих и невидљивих). Стога имају високу селективност према мети, и квантни принос.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Флуоресцентне микроскопије се широко користи од доласка природних и синтетичких боја. Они поседују одређене профиле интензитета емисије и ексцитацијом и циљани специфичним биолошким циљеве.

Идентификација појединачних молекула

Често, у идеалним условима, можете регистровати посебан елемент сјај. За то, између осталог, потребно је обезбедити довољно низак ниво буке детектора и оптичког позадини. Флуоресцеински молекул на пропаст због пхотоблеацхинг може емитовати до 300 хиљада. Фотона. На 20% наплате ефикасности процеса и да их региструју у износу од око 60 хиљада.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Флуоресцентне микроскопије на основу лавине фотодиодама или електронском множења, омогућила је истраживачима да посматрају понашање појединих молекула кроз секунди, а у неким случајевима чак минута.

сложеност

Кључно питање у корист сузбијања оптичког позадинске буке. С обзиром на чињеницу да су многи од материјала који се користе у изради филтера и сочива показују мало аутофлуоресценце, напори научника у раним фазама су оријентисане ка производњи компоненти које имају ниску флуоресценције. Међутим, каснији експерименти довели су до нових закључака. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Посебно, утврђено је да је флуоресцентном микроскопијом, на основу укупне унутрашње рефлексије, омогућава постизање ниску позадину и високог интензитета ексцитације светлост.

механизам

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Принципи флуоресцентне микроскопије, на основу укупне унутрашње рефлексије је употреба еванесцент таласа или еванесцент. Јавља се на граници између медија са различитим индекса преламања. У том случају, светлосни зрак пролази кроз призму. Има високу преламања параметар индек.

Призма поред водени раствор или стакло са ниским параметром. Ако је сноп светлости усмерене на то под углом који је више критичан, зрак је потпуно огледа из интерфејса. Овај феномен, заузврат, изазива нонпропагатинг таласе. Другим речима, генерише електромагнетно поље које продире у медијум са мањим индекса преламања параметар удаљености мањој од 200 нанометара.

Еванесцент талас Интензитет светлости ће бити довољна да узбуди флуорофоре. Међутим, због изузетно малој дубини, њена запремина ће бити веома мали. Резултат је позадина ниског нивоа.

модификација

Флуоресцентне микроскопије заснива се на укупној унутрашњој рефлексији, може бити реализован уз епи-осветљењем. Ово захтева сочива са високом бројчаном бленде (најмање 1,4, а пожељно је да је достигао 1.45-1.6), а делимично осветљен апарат на терену. Касније се постиже са малом величином тачке. За већу униформност користећи танку прстен, који блокира дела потока. За критичне угла, након чега постоји тотална рефлексија, потребан нам је висок ниво преламања од потапања медијума у објектив и поклопцем стакла микроскопа.